柠檬酸合酶（Citrate Synthase，CS）活性检测试剂盒
商品货号：MS1005
英文名称：Micro Citrate Synthase(CS)Assay Kit
别名：柠檬酸合酶试剂盒 CS Kit 柠檬酸合酶(CS）试剂盒 柠檬酸合酶(CS）测试盒,生化法试剂盒
检测方法：微量法
| 商品货号： | 商品品牌： | 规格 | 基本售价 | 选择规格 |
|---|---|---|---|---|
| MS1005 -100管/48样 | 索桥生物 | 100管/48样 | ￥3500.00元 |
测定意义：
CS（EC 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
测定原理：
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB，在 412nm处有特征吸光值。
货号：MS1005 规格：100管/96样
柠檬酸合酶（citrate synthase，CS）试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
CS（EC 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
测定原理：
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB，在 412nm处有特征吸光值。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水
试剂组成和配制：
试剂一：液体100mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体20mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体1.5mL×1支，-20℃保存；
试剂四：液体28mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存；
试剂六：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入1.2mL蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存；
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
- 称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
- 将匀浆600g，4℃离心5min。
- 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
- 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的CS（此步可选做）。
- 在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体CS测定。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂五中加入0.6mL无水乙醇和13mL试剂四，混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
（2）测定管：在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、220μL试剂五和10μL试剂六，混匀，37℃反应15min后立即测定吸光值A1。
（3）对照管：在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、220μL试剂四和10μL试剂六，混匀，37℃反应15min后立即测定吸光值A2。
（4）计算ΔA=A1-A2，每个测定管设一个对照管。
CS活性计算：
- 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=117.6×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CS（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W× V样÷V样总）÷T=23.8×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CS（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（500×V样÷V样总）÷T=0.0475×ΔA
V反总：反应体系总体积，2.4×10-4 L；ε：TNB摩尔消光系数，1.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，0.202 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
- 使用96孔板测定的计算公式如下：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=235.3×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CS（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W ×V样÷V样总）÷T=47.5×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CS（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（500×V样÷V样总）÷T=0.095×ΔA
V反总：反应体系总体积，2.4×10-4 L；ε：TNB摩尔消光系数，1.36×104 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，0.202 mL；T：反应时间，15 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
| 辅酶Ⅰ系列 | ||||
| QS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 500 |
| MS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 920 |
| QS1001 | 乳酸脱氢酶（LDH）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 170 |
| MS1001 | 乳酸脱氢酶（LDH）测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 330 |
| QS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
| MS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
| QS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 320 |
| MS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 600 |
| QS1004 | NADH氧化酶（NOX）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 450 |
| MS1004 | NADH氧化酶（NOX）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 850 |
| QS1005-50 | 柠檬酸合酶(CS）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 3200 |
| QS1005-25 | 柠檬酸合酶(CS）测试盒 | 可见分光光度法 | 25管/24样 | 2000 |
| MS1005 | 柠檬酸合酶(CS）测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 3500 |
| QS1006 | 丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 720 |
| MS1006 | 丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1400 |
| QS1007 | 醇脱氢酶（ADH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
| MS1007 | 醇脱氢酶（ADH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
| QS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 800 |
| MS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1550 |
| QS1009 | 乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 420 |
| MS1009 | 乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 800 |
| QS1010 | NAD激酶（NADK）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 600 |
| MS1010 | NAD激酶（NADK）测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 1100 |
| QS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24样 | 1280 |
| MS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 2500 |
