柠檬酸合酶（Citrate Synthase，CS）试剂盒
商品货号：QS1005
英文名称：Citrate Synthase(CS)Assay Kit
别名：柠檬酸合酶试剂盒 CS Kit 柠檬酸合酶(CS）试剂盒 柠檬酸合酶(CS）测试盒,生化法试剂盒
检测方法：常量法
| 商品货号： | 商品品牌： | 规格 | 基本售价 | 选择规格 |
|---|---|---|---|---|
| QS1005-25管/24样 | 25管/24样 | ￥2000.00元 | ||
| QS1005-50管/48样 | 50管/48样 | ￥3200.00元 |
测定意义：
CS（EC 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
测定原理：
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB，在 412nm处有特征吸光值。
货号：QS1005-25 规格：25管/24样
柠檬酸合酶（citrate synthase，CS）试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
CS（EC 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
测定原理：
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB，在 412nm处有特征吸光值。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水
试剂组成和配制：
试剂一：液体25mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体5mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体0.5mL×1支，-20℃保存；
试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1支，4℃保存，临用前加入800μL无水乙醇，用不完的试剂4℃保存一周；
试剂六：粉剂×2支，-20℃保存，临用前加入400μL蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂七：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入800μL蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存；
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
- 称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
- 将匀浆600g，4℃离心5min。
- 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
- 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的CS（此步可选做）。
- 在步骤④中的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体CS测定。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、将试剂四、五、六和七在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min。
3、样本测定
试剂名称（μL） | 测定管 |
试剂四 | 780 |
试剂五 | 30 |
试剂六 | 30 |
样本 | 30 |
试剂七 | 30 |
将上述试剂按顺序加入1 mL玻璃比色皿中，加试剂七的同时开始计时，在412nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和反应2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
CS活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1100×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CS（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W× V样÷V样总）÷T=222.2×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CS（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（500×V样÷V样总）÷T=0.4444×ΔA
V反总：反应体系总体积，9×10-4 L；ε：TNB摩尔消光系数，1.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.03 mL；V样总：加入提取液体积，0.202 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
| 辅酶Ⅰ系列 | ||||
| QS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 500 |
| MS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 920 |
| QS1001 | 乳酸脱氢酶（LDH）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 170 |
| MS1001 | 乳酸脱氢酶（LDH）测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 330 |
| QS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
| MS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
| QS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 320 |
| MS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 600 |
| QS1004 | NADH氧化酶（NOX）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 450 |
| MS1004 | NADH氧化酶（NOX）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 850 |
| QS1005-50 | 柠檬酸合酶(CS）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 3200 |
| QS1005-25 | 柠檬酸合酶(CS）测试盒 | 可见分光光度法 | 25管/24样 | 2000 |
| MS1005 | 柠檬酸合酶(CS）测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 3500 |
| QS1006 | 丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 720 |
| MS1006 | 丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1400 |
| QS1007 | 醇脱氢酶（ADH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
| MS1007 | 醇脱氢酶（ADH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
| QS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 800 |
| MS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1550 |
| QS1009 | 乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 420 |
| MS1009 | 乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 800 |
| QS1010 | NAD激酶（NADK）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 600 |
| MS1010 | NAD激酶（NADK）测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 1100 |
| QS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24样 | 1280 |
| MS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 2500 |
