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柱式法提取细胞 RNA 试剂盒

货号：R1250

规格：50T/100T

保存：室温（15℃-25℃）干燥保存，有效期 1 年。2℃-8℃保存时间更长。

注意：使用前请先在结合液中加入异丙醇，漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。

产品简介：

该试剂盒对经典的异硫氰酸胍抽提 RNA 的方法进行了改良。改良后的裂解液能迅速裂解细胞，释放出 RNA 的同时灭活 RNase。RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜上，再通过一系列漂洗和离心等步骤进一步将蛋白等杂质去除，最后用 RNase-Free ddH2O 将 RNA 从硅基质膜上洗脱。本试剂盒操作快速便捷，安全无需使用酚、氯仿等有毒试剂，操作安全。

操作步骤：

1、细胞裂解取 1*106~7 个细胞，每管加入 500ul 裂解液 A，加入 50ul 溶液 B 用移液枪吹打混匀，RT 放置 5min。

2、向离心管中加入 700μl 结合液 C(使用前请先检查是否已加入异丙醇)，上下颠倒充分混匀。

3、向吸附柱中加入 600ul 混合液，静置 1min。4℃ 12000rpm 离心 1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管（收集管留下，用于步骤 5 使用）中。

备注：由于体积过大，需二次上柱，再将剩余混合液重复步骤 3

4、将吸附柱放到新的干净的 2ml 收集管上，在吸附柱中加入 500μL RNA 洗脱液，4℃，12000rpm 离心 2min，收集滤液，扔掉吸附柱。

5、在滤液中加入 700μl 结合液，用移液枪吹打混匀后加入到新的吸附柱中，（使用步骤 3 的收集管），4℃，12000rpm 离心 2min，弃滤液。

备注：由于体积过大，需二次上柱，再将剩余混合液重复步骤 5

6、向离心管中加入 600μL 漂洗液 1（使用前请确认是否已加入无水乙醇），静置1min，4℃，12000rpm 离心 1min，弃滤液。

7、向离心管中加入 600μL 漂洗液 2（使用前请确认是否已加入无水乙醇），4℃，12000rpm 离心 1min，弃滤液。

8、4℃，12000rpm 离心 2min，将吸附柱敞口室温放置 3min，以除去多余的乙醇。

9、将吸附柱放到一个干净的离心管上，向吸附柱中加入 30-100μL 洗脱液，室温放置 2min，4℃，12000rpm 离心 2min，得到 RNA 溶液，RNA 保存于-80℃。

注意事项：

1、所有相关器皿耗材都应为 RNase-free 产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中 RNA 酶污染样品。

2、洗脱液的体积不应少于 30μL，体积过少会影响提取效率，RNA 产物应保存在-80℃，以防 RNA 降解。

3、RNA 浓度及纯度检测：提取的 RNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260/OD280 比值应为 2.0-2.2。