质粒提取原理及流程

质粒提取原理及流程：
较常用的质粒DNA提取方法有3种：碱裂解法、煮沸法和去污剂
（如Triton和SDS）裂解法。前两种方法比较剧烈，适用于较小的质粒
（<15kb）。去污剂裂解法则比较温和，一般用于分离大质粒（>15kb）。
碱裂解法是一种应用为广泛的制备质粒DNA的方法，其原理
为：染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为线状分
子，而质粒DNA为共价闭合环状分子；当用碱处理DNA溶液时，
线状染色体DNA容易发生变性，共价闭环的质粒DNA在回到中性
时即恢复其天然构象；变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞
碎片结合形成沉淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态
存在液相中，离心去除沉淀后，就可从上清中回收质粒DNA。
目前，市面上质粒提取试剂盒大多数都是采取上述的碱裂解方法，
不同之处在于纯化方式。目前比较常用的纯化系统是硅基质吸附材
料，其原理为在高盐环境下质粒DNA能够结合到硅基质上，然后用
低盐缓冲液或水将质粒DNA从硅基质上洗脱下来。得到的质粒可以
用于酶切、PCR、测序、细菌转化、转染等分子生物学实验。