TNFα免疫组化染色试剂盒

更新时间：2010-01-04 | 点击率：7696

系列SABC试剂盒使用说明书

TNFα免疫组化染色试剂盒

产品编号：SA 2041

保存：4℃冷藏

有效期：一年

工作原理：

TNFα是肿瘤坏死因子α抗原，该蛋白和诱导细胞的快速死亡有关。

抗体：兔抗TNFα抗原，亲和纯化抗体。

适宜种属：人、大鼠、小鼠组织。

标本处理：细胞涂片，冰冻和石蜡切片。

染色模式：细胞浆。

试剂盒内容：

1．5％BSA封闭液2ml或5ml，组织切片的封闭。

2．兔抗TNFα抗原2ml或5ml。

3．生物素化山羊抗兔IgG，2ml或5ml。

4．SABC，2ml或5ml。链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物。

5．阳性对照片1-2张。

用户自备试剂：

1.APES或POLY-L-LYSINE（有售）。

2.PBS（Ph7.2-7.6）配法：1000ml蒸馏水中加氯化钠9g，Na2HPO4.12H2O 6g，Na2HPO4.2H2O 0.4g。

3.DAB显色试剂盒（有售）。

石蜡切片微波修复抗原染色程序：

1．载玻片防脱片剂处理：可选择APES或POLY-L-LYSINE。捞片后置烤箱60℃ 30-60分钟以使切片紧密粘附。

2．切片脱腊至水。

3． 30％H2O2 1份+蒸馏水10份混合，室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。

4．滴加5％BSA封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，不洗，

5．滴加兔抗TNFα抗体，37℃ 1-2小时或4℃过夜。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟3次。

6．滴加生物素化山羊抗兔IgG，20-37℃ 20分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟3次。

7．滴加试剂SABC,20-37℃ 20分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗5分钟4次。

8． DAB显色：使用DAB显色试剂盒（AR1022）。取1ml蒸馏水，加试剂盒中A,B,C试剂各1滴，混匀后加至切片。室温显色，镜下控制反应时间，一般5-30分钟。蒸馏水洗涤。

9．苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。

血涂片，培养细胞和冰冻切片染色程序：

1．载玻片经防脱片剂处理（POLY-L-LYSINE）。

2．抗凝血经分层离心后涂片；培养细胞也可涂片或贴片生长；切片室温风扇吹干。

3．固定方案4％多聚甲醛或10％福尔马林固定30分钟；对不能耐受甲醛固定的抗原，纯丙酮室温固定30分钟。蒸溜水洗。（干燥后可冰冻保存）。

4． 30％H202 1份+纯甲醇50份混合，室温浸泡30分钟，以灭活内源性过氧化酶。蒸馏水洗。

5．其余步骤和石蜡切片4-9步相同。

结果：阳性细胞浆着色呈棕黄色。

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