人CTGF定量EIA试剂盒使用说明
原理
本实验采用双抗体夹心ABC-EIASA法。用抗人CTGF单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的CTGF与单抗结合，加入生物素化的抗人CTGF，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入酶底物TMB，出现蓝色，加终止液硫酸，颜色变黄，在450nm处测OD值，CTGF浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中的CTGF浓度。
试剂盒组成
1． 96孔微孔板：一块，已包被抗人CTGF单抗。
2． 样品稀释液：一瓶
3． *抗体工作液：一瓶
4． 酶标抗体工作液：一瓶
5． 底物稀释液：两瓶
6． 终止液：一瓶
7． 洗涤液（20X）：一瓶
8． 标准品（冻干粉，2000ng/ml ）：一管
9． 坐标纸：一张
准备试剂与收集血样
1． 洗涤液：用重蒸水1：20稀释。
2． 收集血液标本：采集血清或培养液尽早检测，2-8℃保存一天；需更长时间须冷冻（-20℃）保存，避免反复冻融。
3． 标准品液配制：使用前每管中加入100ul蒸馏水溶解后即可。
4． 底物工作液配制：使用前将OPD片放入底物稀释液中溶解，每片加液5ml。
检测程序
1． 建立标准曲线：设标准孔8孔，每孔中各加入样品稀释液100ul，*孔加标准品100ul，混匀后用加样器吸出100ul，移至第二孔。如此反复作倍比稀释至第七孔，后，从第七孔中吸出100ul弃去，使之体积均为100ul。第八孔为空白对照。
2． 加样：待测品孔每孔各加入待测样品100ul。
3． 将反应板充分混匀后置37℃ 120分钟。
4． 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4－6次，向滤纸上印干。
5． 除空白孔外，每孔中加入*抗体工作液50ul。
6． 将反应板置37℃ 60分钟。
7． 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4－6次，向滤纸上印干。
8． 除空白孔外，每孔加酶标抗体工作液100ul。
9． 将反应板置37℃ 60分钟。
10．洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4－6次，向滤纸上印干
11．每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应5－15分钟（视颜色深浅灵活掌握）。
12．每孔加入50ul终止液混匀。
13．在450nm处测吸光值。
结果计算与判断
1． 所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2． 以标准品1000、500、250、125、62、31.25、15.63、0ng/ml之OD值在半对数纸上作图，画出标准曲线。
3． 根据样品OD值在该曲线图上查出相应CTGF含量。
注意事项
1． 本试剂盒宜置-20℃冰箱保存。
2． 本试剂盒取出的试剂在室温条件下使用，溶液应轻轻摇匀后使用。
3． 本试剂盒含2M硫酸，不要将它与含叠氮钠的废物混在一起。
4． 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。
