技术文章

返回

对于NC膜的应用技巧都在这里

点击次数:4880    更新时间:2021-09-14

  酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane,简称NC膜),是蛋白印迹*泛使用的转移介质,对蛋白有很强的结合能力,而且适用于各种显色方法,包括同位素,化学发光(Luminol类)、常规显色、染色和荧光显色;背景低,信噪比高。在胶体金试纸中用做C/T线的承载体,同时也是免疫反应的发生处。NC膜是生物学试验中最重要的耗材之一。
 
  NC膜的应用技巧:
 
  1. 蛋白与膜的结合原理
 
  蛋白与膜的结合原理, 已知的结合力包括疏水作用力\H键\静电作用力等,确切的结合原理并不明确,主要靠假说来支撑。主要有两种假说:
 
  1)首先两者靠静电作用力结合,然后靠H键和疏水作用来维持长时间结合。
 
  2)首先两者靠疏水作用结合,然后靠静电作用来维持长时间结合。
 
  两条假说,都表明其结合过程分为两步,首先结合和后面长时间结合。由于结合原理的不明确性,导致在这方面的工作非常依赖实践经验。
 
  2. 膜对结合的影响
 
  1)膜孔径
 
  有些技术人员倾向使用膜孔径来区分不同的膜,但是请注意这只仅仅限于同一厂家的产品,如果是不同厂家的产品,这种比较是无意义的。
 
  膜孔径与层析速度的关系,已在上文描述。随着膜孔径减小,膜的实际可用表面积递增,膜结合蛋白的量也递增。估量表面积的参数为表面积比率(实际可用表面积与所用膜平面积的比率)。另外,膜孔径越小,层析速度也越小,那么金标复合物通过T线的时间也就越长,反应也就越充分。
 
  综合以上两点,结论为膜孔径越小灵敏度越高。但是同时也减慢了跑板速度,增加了非特异性结合的机会,也就是假阳性越高.所以要按照试验结果挑选适合实际项目的膜,找到合适的平衡点。