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结合态淀粉合成酶 （Granule-Bound Starch Synthase，GBSS）试剂盒
商品货号：QS3405
英文名称：Granule-bound starch synthase Assay Kit
别名：结合态淀粉合成酶试剂盒 GBSS Kit 结合态淀粉合成酶(GBSS）试剂盒
检测方法：常量法
| 商品货号： | 商品品牌： | 规格 | 基本售价 | 选择规格 |
|---|---|---|---|---|
| QS3405-25管/24样 | 索桥生物 | 25管/24样 | ￥2000.00元 | |
| QS3405-50管/48样 | 索桥生物 | 50管/48样 | ￥3200.00元 |
产品详细介绍
测定意义：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链淀粉的合成。
测定原理：
GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH的增加量，可以计算GBSS活性。
产品说明书
货号：QS3405-50 规格：50 管/48 样
结合态淀粉合成酶 （Granule-bound starch synthase，GBSS）试剂盒说明书
紫外分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链 淀粉的合成。
测定原理：
GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP； 进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP+还 原为 NADPH，其中 NADPH 生成量与前一步反应生成的 ADP 数量呈正比，通过 340nm 下测定 NADPH 的增加量，可以计算 GBSS 活性。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 60mL×2 瓶，4℃保存；
液体一：7mL×2 瓶，4℃保存；
液体二：4mL×2 瓶，4℃保存；
液体三：8mL×2 瓶，4℃保存；
粉剂一：2 支，4℃保存；
粉剂二：2 支，4℃保存；
粉剂三：2 支，-20℃保存；
粉剂四：2 支，4℃保存；
粉剂五：2 支，4℃保存；
粉剂六：2 支，-20℃保存；
粉剂七：2 支，-20℃保存；
粉剂八：2 支，4℃保存；
粉剂九：2 支，4℃保存；
粉剂十：2 支，-20℃保存；
试剂一：液体×1 支，-20℃保存；临用前加入 500μ L 蒸馏水，充分溶解备用；用不完的 试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 500μ L 蒸馏水，充分溶解备用；用不完的 试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
反应液Ⅰ的配制：临用前取液体一、粉剂一、粉剂二和粉剂三各一支，依次把粉剂一、粉 剂二和粉剂三转移到液体一中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
反应液Ⅱ的配制：临用前取液体二、粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七各一支，依次把粉 剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七转移到液体二中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存， 禁止反复冻融。
反应液Ⅲ的配制：临用前取液体三、粉剂八、粉剂九和粉剂十各一支，依次把粉剂八、粉 剂九和粉剂十转移到液体三中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
粗酶液制备：
称取 0.1~0.2g 组织（建议称取约 0.1g 组织），加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。10000g ， 4℃离心 10min，弃上清，在沉淀中加入 1mL 提取液充分混匀，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、在 EP 管中按顺序加入下列试剂
| 试剂名称（μ L） | 测定管 |
| 样本 | 150 |
| 反应液Ⅰ | 270 |
| 混匀，30℃保温 20 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却 | |
| 反应液Ⅱ | 150 |
| 混匀，30℃保温 30 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失）， 冰浴冷却，10000g 25℃离心 10min，取上清液 | |
| 上清液 | 450 |
| 反应液Ⅲ | 300 |
| 试剂一 | 10 |
| 试剂二 | 10 |
混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，计算 Δ A=A2-A1。
注意：反应液Ⅰ如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
GBSS 活性计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 GBSS（nmol/min/mg prot）＝[Δ A×V 反总÷（ε ×d）×109 ]÷(V 样×Cpr) ÷T×稀释倍数 =522×Δ A÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GBSS 活性（nmol/min/g 鲜重）=[Δ A×V 反总÷（ε ×d）×109 ]÷（W ×V 样÷V 样总）÷T× 稀释倍数=522×Δ A÷W
V 反总：反应体系总体积，5.7×10-4 L；ε ：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm； d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.15 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，2 min；稀释倍数：1.71；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。
| 淀粉系列 | 单价 | |||
| QS3400 | 淀粉含量测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 260 |
| MS3400 | 淀粉含量测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 500 |
| QS3401 | α-淀粉酶测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 250 |
| MS3401 | α-淀粉酶测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 480 |
| QS3402 | β-淀粉酶测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 460 |
| MS3402 | β-淀粉酶测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 900 |
| QS3403-50 | ADPG焦磷酸化酶(AGP）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 2300 |
| QS3403-25 | ADPG焦磷酸化酶(AGP）测试盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24样 | 1600 |
| MS3403 | ADPG焦磷酸化酶(AGP）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 4400 |
| QS3404-50 | 可溶性淀粉合成酶(SSS）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 3200 |
| QS3404-25 | 可溶性淀粉合成酶(SSS）测试盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24样 | 2000 |
| MS3404 | 可溶性淀粉合成酶(SSS）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 6000 |
| QS3405-50 | 结合态淀粉合成酶(GBSS）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 3200 |
| QS3405-25 | 结合态淀粉合成酶(GBSS）测试盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24样 | 2000 |
| MS3405 | 结合态淀粉合成酶(GBSS）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 6000 |
| QS3406 | 淀粉分支酶（SBE）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 850 |
| MS3406 | 淀粉分支酶（SBE）测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 1600 |
