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非蛋白巯基检测试剂盒

商品货号：MS1520
英文名称：Non-protein sulfhydryl group Assay Kit
别名：非蛋白质巯基试剂盒 非蛋白质巯基测试盒
检测方法：微量法

• 产品详细介绍
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测定意义：

生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

测定原理：

巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有大吸收峰。

• 产品说明书

货号：MS1520                                    规格：100 管/48 样

非蛋白巯基测定试剂盒说明书 微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功 能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

测定原理：

巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处 有大吸收峰。 自备实验用品及仪器： 天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和甲醇。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 1 mL×1 管，4℃避光保存。

样品的制备：

1. 动物、植物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后加入 4mL 甲醇，室温震荡 10min，然后 10000g， 4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细 胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min） 然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

3. 血清、培养液：取 0.1mL，加 0.4mL 甲醇，室温震荡 10min，然后 10000g，4℃离心 10min， 取上清置冰上待测。

操作步骤：

1、分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。

2、操作表

                     对照管              测定管

样品（μ L）              40                 40 

试剂一（μ L）            150                 150

试剂二（μ L）                               10

H2O（μ L）              10 

计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y = 1.7236 x，R 2 = 0.9994

1. 组织：

非蛋白质巯基含量（μ mol/g 鲜重）= 1.7236 /A ×V 反总÷ (V 样÷V 样总×W) ×5=14.5×Δ A÷ W

2. 血清、培养液：

非蛋白质巯基巯基含量（μ mol/mL）= 1.7236 /A ×V 反总÷V 样×5=14.5×Δ A

3. 细胞：

非蛋白质巯基含量（μ mol/10^4）= 1.7236 /A ×V 反总÷ (V 样÷V 样总×细胞数量) ×5 =14.5×Δ A÷细胞数量

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，1mL； W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；

注意事项： 低检出限为 10μ mol/L。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.8618x，R 2 = 0.9994

1. 组织：

非蛋白质巯基含量（μ mol/g 鲜重）= 0.8618 /A ×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×5= 29×Δ A÷W

2. 血清、培养液：

非蛋白质基含量（μ mol/L）= 0.8618/A ×V 反总÷V 样×5=29×Δ A

3. 细胞：

非蛋白质巯基含量（μ mol/10^4）= 0.8618 /A ×V 反总÷ (V 样÷V 样总×细胞数量) ×5 =29×Δ A÷细胞数量

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，1mL； W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；

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