NADH 氧化酶（NADH Oxidase，NOX）活性检测试剂盒
商品货号：MS1004
英文名称：Micro NADH Oxidase(NOX) Assay Kit
别名：NADH氧化酶试剂盒 NOX Kit NADH氧化酶（NOX）试剂盒 NADH氧化酶（NOX）测试盒
检测方法：微量法
| 商品货号： | 商品品牌： | 规格 | 基本售价 | 选择规格 |
|---|---|---|---|---|
| MS1004-100管/96样 | 索桥生物 | 100管/96样 | ￥850.00元 |
测定意义：
NOX（EC 1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生，而且与免疫反应密切相关。
测定原理：
NOX能够将NADH氧化为NAD，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
货号：MS1004 规格：100管/96样
NADH 氧化酶（NADH oxidase，NOX）试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
NOX（EC 1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生，而且与免疫反应密切相关。
测定原理：
NOX能够将NADH氧化为NAD，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制：
试剂一：液体100mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体20mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体1.5mL×1瓶，-20℃保存；
试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入5mL蒸馏水，用不完的试剂分装后-20℃保
存，禁止反复冻融。
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
- 准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
- 将匀浆600g，4℃离心5min。
- 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11100g，4℃离心10min。
- 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的NOX（此步可选做）。
- 步骤④中的沉淀即为线粒体，加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于NOX活性测定。
血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
- 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。
- 样本测定
（1）试剂四于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、200μL试剂四和40μL试剂五，混匀，记录600nm处20s时吸光值A1和 1min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
NOX活力单位的计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）NOX活力的计算:
单位的定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX（U/mL）＝ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T=2500×ΔA
2、组织、细菌或细胞中NOX活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX（U/g 鲜重）=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T=505×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX（U/104 cell）=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T=1.01×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.25mL； V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，0.202 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量；500：细胞或细菌总数，500万。
b.使用96孔板测定的计算公式如下：
1、血清（浆）NOX活力的计算:
单位的定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。
NOX（U/mL）＝ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T=5000×ΔA
2、组织、细菌或细胞中NOX活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。
NOX（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.005÷T=5000×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。
NOX（U/g 鲜重）=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T=1010×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。
NOX（U/104 cell）=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T=2.02×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.25mL； V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，0.202 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量；500：细胞或细菌总数，500万。
| 辅酶Ⅰ系列 | ||||
| QS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 500 |
| MS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 920 |
| QS1001 | 乳酸脱氢酶（LDH）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 170 |
| MS1001 | 乳酸脱氢酶（LDH）测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 330 |
| QS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
| MS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
| QS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 320 |
| MS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 600 |
| QS1004 | NADH氧化酶（NOX）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 450 |
| MS1004 | NADH氧化酶（NOX）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 850 |
| QS1005-50 | 柠檬酸合酶(CS）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 3200 |
| QS1005-25 | 柠檬酸合酶(CS）测试盒 | 可见分光光度法 | 25管/24样 | 2000 |
| MS1005 | 柠檬酸合酶(CS）测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 3500 |
| QS1006 | 丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 720 |
| MS1006 | 丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1400 |
| QS1007 | 醇脱氢酶（ADH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
| MS1007 | 醇脱氢酶（ADH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
| QS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 800 |
| MS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1550 |
| QS1009 | 乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 420 |
| MS1009 | 乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 800 |
| QS1010 | NAD激酶（NADK）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 600 |
| MS1010 | NAD激酶（NADK）测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 1100 |
| QS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24样 | 1280 |
| MS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 2500 |
