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辅酶ⅠNAD(H)含量试剂盒
商品货号：QS1000
英文名称：NAD(H) Kit
别名：辅酶Ⅰ含量测定试剂盒 NAD(H) Kit 辅酶ⅠNAD(H)含量测定试剂盒 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒
检测方法：常量法
| 商品货号： | 商品品牌： | 规格 | 基本售价 | 选择规格 |
|---|---|---|---|---|
| QS1000-50管/24样 | 50管/24样 | ￥500.00元 |
- 产品详细介绍
- 产品说明书
测定意义：
辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循环（TCA）的主要氢受体，生成的NADH经呼吸电子链（ETC）传递把电子交给氧，在合成ATP的同时，形成大量的ROS，同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外，NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理：
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH，NADH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT）为甲瓒，在570nm下检测吸光值；而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH，进一步采用MTT还原法检测。
货号：QS1000 规格：50管/24样
辅酶ⅠNAD(H)含量试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循环（TCA）的主要氢受体，生成的NADH经呼吸电子链（ETC）传递把电子交给氧，在合成ATP的同时，形成大量的ROS，同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外，NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理：
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH，NADH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT）为甲瓒，在570nm下检测吸光值；而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH，进一步采用MTT还原法检测。
自备的实验用品及仪器：
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
酸性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；
碱性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体15 mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体4 mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，-20 ℃避光保存，用时加入4mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃
保存一周；
试剂四：粉剂×1瓶，4 ℃避光保存，用时加入4mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保
存一周；
试剂五：液体1.8mL×1支，4 ℃保存；
试剂六：液体30mL×1瓶，4 ℃保存；
试剂七：液体50mL×1瓶，4 ℃保存。
NAD+和NADH的提取：
1 血清（浆）中NAD+和NADH的提取
NAD+的提取：按照血清（浆）体积（mL）：酸性提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取约0.1mL血清（浆），加入1mL酸性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μL上清液，加入500μL碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
NADH的提取：按照血清（浆）体积（mL）：碱性提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取约0.1mL血清（浆），加入1mL碱性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μL上清液，加入500μL酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2组织中NAD+和NADH的提取：
NAD+的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取约0.1g组织，加入1mL酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μL上清液，加入500μL碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
NADH的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取约0.1g组织，加入1mL碱性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μL上清液，加入500μL酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3 细胞或细菌中NAD+和NADH的提取：
NAD+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：酸性提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL酸性提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μL上清液，加入500μL碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
NADH的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：碱性提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL碱性提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μL上清液，加入500μL酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
- 分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。
- 加样表(在1.5mL棕色EP管中按下表依次加样）：
试剂名称(μL) | 对照管 | 测定管 |
样本 | 50 | 50 |
试剂一 | 250 | 250 |
试剂二 | 75 | 75 |
试剂三 | 75 | 75 |
试剂四 | 75 | 75 |
试剂五 | 35 | 35 |
试剂六 | 500 | 混匀，室温避光静置20min |
试剂六 |
| 500 |
充分混匀，静置5min后，20000g，25℃离心5min，弃上清，沉淀中加入：
试剂七 | 1000 | 1000 |
混匀，570nm下比色，读取对照吸光值A1和测定管吸光值A2，计算△A=A2-A1。
注意事项：
1、如果一次性测定样本数较多，可将试剂一、二、三和四按比例配成混合液。
2、对照管和测定管的测定步骤的区别：对照管加完试剂一、二、三、四和五后必须马上加试剂六；测定管加完试剂一、二、三、四和五后必须反应20min后再加试剂六。
3、反应过程中注意避光。
4、由于每一个测定管需要设一个对照管，本试剂盒50管保证测24个NAD+或NADH.。
NAD+和NADH含量的计算：
（一）NAD+含量的计算
1、血清（浆）中NAD+含量计算
NAD+含量(nmol/mL）=[ (△A -0.099）×36.1×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 722×(△A -0.099）
2、组织、细菌或细胞中NAD+含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算
NAD+ (nmol/mg prot）=[ (△A -0.099）×36.1×V1)]÷(V1×Cpr)= 36.1×(△A -0.099）÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
NAD+ (nmol/g 鲜重）= [ (△A -0.099）×36.1×V1)]÷(W×V1÷V2)= 72.2×(△A -0.099）÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
NAD+ (nmol/104 cell）=[ (△A -0.099）×36.1×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.1444×(△A -0.099）
（二）NADH含量的计算
1、血清（浆）中NADH含量计算
NADH含量(nmol/mL）= [ (△A -0.065）×24.7×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 494×(△A -0.065）
2、组织、细菌或细胞中NADH含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算
NADH (nmol/mg prot）= [ (△A -0.065）×24.7×V1) ]÷(V1×Cpr)= 24.7×(△A -0.065）÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
NADH (nmol/g 鲜重）= [ (△A -0.065）×24.7×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 49.4×(△A -0.065）÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
NADH (nmol/104 cell）= [ (△A -0.065）×24.7×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.0988×(△A -0.065）
V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，2mL；V3：加入血清（浆）体积：0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
注意：低检测限为1nmol/mL或1nmol/g鲜重 或0.01nmol/mg prot
| 辅酶Ⅰ系列 | ||||
| QS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 500 |
| MS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 920 |
| QS1001 | 乳酸脱氢酶（LDH）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 170 |
| MS1001 | 乳酸脱氢酶（LDH）测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 330 |
| QS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
| MS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
| QS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 320 |
| MS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 600 |
| QS1004 | NADH氧化酶（NOX）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 450 |
| MS1004 | NADH氧化酶（NOX）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 850 |
| QS1005-50 | 柠檬酸合酶(CS）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 3200 |
| QS1005-25 | 柠檬酸合酶(CS）测试盒 | 可见分光光度法 | 25管/24样 | 2000 |
| MS1005 | 柠檬酸合酶(CS）测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 3500 |
| QS1006 | 丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 720 |
| MS1006 | 丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1400 |
| QS1007 | 醇脱氢酶（ADH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
| MS1007 | 醇脱氢酶（ADH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
| QS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 800 |
| MS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1550 |
| QS1009 | 乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 420 |
| MS1009 | 乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 800 |
| QS1010 | NAD激酶（NADK）测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 600 |
| MS1010 | NAD激酶（NADK）测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 1100 |
| QS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24样 | 1280 |
| MS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 2500 |
