洗脱产物的DNA量很少或没有

所提样品材料老化或反复冻融导致基因组DNA含量下降

应选择新鲜的样品材料，如新鲜血液、新鲜菌液、刚离体的动物组织或幼嫩的植物组织等，不能即时处理的样品应立即放入液氮或-70℃低温保存，以免DNA降解。

样品破壁或裂解不*导致基因组DNA未充分释放

动、植物材料应在液氮中充分研磨匀浆，G⁺细菌、酵母等破壁较困难的样品应用溶菌酶、酵母破壁酶或机械方式协助破壁，不同样品的细胞破壁方式可参照前面的详细介绍。

样品量过多导致细胞裂解不充分

加样量过多使裂解液和样品混合不均匀，细胞裂解不充分。不同来源样品的加样量请参照详细操作步骤。

DNA吸附不充分

如在上吸附柱前末加无水乙醇，或用低浓度乙醇代替无水乙醇，则导致DNA不能充分沉淀，与硅胶膜吸附不*，因此应在样品裂解后加适量无水乙醇，再上吸附柱使DNA与硅胶膜充分吸附。

DNA洗脱不适当

洗脱液pH值过低会降低洗脱效率，应确保洗脱液pH值在7.0-8.5之间；洗脱体积若小于30μ，则不易*浸透硅胶膜，使DNA不能全部洗脱下来，因此洗脱液体积应大于30 μl，同时如洗脱液体积过大，超过200μl，则所得的DNA浓度会降低，但DNA总量不会减少；洗脱时可将洗脱缓冲液在65-70℃水浴预热，加入洗脱液后在室温静置2-5分钟，可提高洗脱效率，提高基因组DNA的产量。

提取的基因组DNA有降解

选取的材料不新鲜或反复冻融，采集材料后未及时处理或末低温保存

陈旧血液、老化菌液等不新鲜的材料中，细胞凋亡导致DNA降解，或低温保存的样品反复冻融导致细胞破碎，内源核酸酶降解DNA，因此应选择新鲜的材料样品，不能及时处理则低温保存，运输过程中亦应使用干冰。

未能有效抑制内源核酸酶作用

某些DNase含量较丰富的动、植物组织样品应在液氮中研磨或匀浆，研磨过程中应随时补充液氮，并在样品末*解冻前即加入含有抑制核酸酶作用的鳌合剂的裂解液。

操作过于剧烈导致DNA被机打断

预处理的样品加入细胞裂解液后，所有操作应尽量柔和，避免振荡、搅拌等剧烈机械力对DNA片段的损伤。

提取的基因组DNA中有RNA污染

实验过程中没有有效使用RNase A

应严格按照实验操作要求使用，即加入裂解液的同时加入20μl RNase A溶液，室温放置10分钟。

RNAase A可能失活

RNase A须在-20℃下保存，低温保存时RNase A比较稳定，不易失活，但如果反复冻融会导致RNase A降解失活，所以应妥善保存。

提取的基因组DNA不能顺利地进行后续试验

样品量过多导致细胞裂解不充分

样品量过多会使裂解液不能快速有效地与样品充分混合，从而导致样品裂解不*，残留大量蛋自、多糖、脂类等杂质，为后续的上吸附柱分离纯化造成影响。应加入适当量的样品材料，具体数量请参照详细操作步骤。

DNA在洗脱前有大量乙醇残留

有机溶剂乙醇可严重抑制内切酶、DNA聚合酶的活性，而在DNA过柱洗涤过程中需使用含有乙醇的漂洗液，因此在洗脱DNA前，—定要充分去除残留的乙醇，可重复离心，或将吸附柱置于室温或50℃温箱中烘干5-10分钟，再加洗脱液。